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lunes, 29 de agosto de 2016

Extracción de DNA






Extracción de Ácido Desoxirribonucleico (DNA):

La extracción de DNA consta de una etapa de lisis, que consiste en romper las estructuras que confinan el citoplasma y liberar al medio su contenido y otra de purificación, que implica la retirada de la solución final de la mayoría de elementos que pueden interferir en la PCR.




Etapas en la extracción de DNA

Los pasos necesarios para una correcta extracción y purificación del DNA mediante un proce- dimiento químico son:
  1. Lisis de las células o virus. Las sales caotrópicas ayudan a romper la estructura tridimensional de macromoléculas como las proteínas o los ácidos nucleicos consiguiendo su desnaturalización. La adición de un detergente como el SDS es necesaria a menudo para eliminar las membranas.
  2. Degradación de la fracción proteica asociada al DNA. Se consigue mediante la adición de una proteasa. La fracción proteica puede precipitarse mejor con la ayuda de sales como el acetato de amonio o el acetato sódico.
  3. Purificación. Consta de 3 fases. Precipitación del DNA. El DNA es insoluble en alcohol, por lo que se puede precipitar etanol frío o isopropanol i recuperar mediante una centrifugación. El alcohol del sobrenadante se llevará las sales añadidas previamente. 

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